甲狀腺/甲狀旁腺組織消化手冊

更新時間：2016-02-16

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年，但是對其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒有全面的理解。由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過去的經(jīng)驗，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實驗?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實驗結(jié)果。

細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細(xì)胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：

1、組織類型

2、物種來源

3、動物年齡

4、遺傳改造情況（如knockouts）

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時間

通常前四個原因沒辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗決定以獲取zui適實驗結(jié)果。

通過查閱文獻(xiàn)來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動態(tài)的特性，以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識和方法，描述了標(biāo)準(zhǔn)的實驗步驟，以便于制定一個*的細(xì)胞分離方案，同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。

下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻(xiàn)，以組織類型和物種分類，詳見鏈接）

脂肪組織	腎上腺組織	骨組織	腦組織
軟骨組織	結(jié)腸組織	內(nèi)皮組織	上皮組織
眼	心臟	腸	腎
肝	肺	淋巴結(jié)	乳腺
其它組織	其他組織	肌組織	神經(jīng)組織
胰腺	腮腺	垂體	前列腺
生殖	動物鱗片	皮膚	脾臟
干細(xì)胞	胸腺	甲狀腺/甲狀旁腺	扁桃體
腫瘤

注：使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

甲狀腺/甲狀旁腺組織消化手冊

物種	詳細(xì)來源	細(xì)胞名稱	消化用酶	培養(yǎng)基	參考文獻(xiàn)
牛	牛, 成年的	Parathyroid	Deoxyribonuclease I: 0.005%,	HEPES Ham's F10	Nygren, P., Gylfe, E., Larsson, R., Johansson, H., Juhlin, C., Klareskoq, L., Akerstrom, G., and Rastad, J.: Modulation of the Ca2+-Sensing Function of Parathyroid Cells In Vitro and in Hyperparathyroidism, Biochim Biophys Acta 968, 253, 1988
牛	牛	Parathyroid glands	Deoxyribonuclease I: 0.0075%	HEPES buffer	Wallace, J., and Scarpa, A.: Regulation of Parathyroid Hormone Secretion in Vitro by Divalent Cations, J Biol Chem 257, 10613, 1982
牛	牛	Parathyroid	Deoxyribonuclease I: 0.004%	Eagle's #2 medium without bicarbonate	Brown, E., Hurwitz, S., and Aurbach, G.: Preparation of Viable Isolated Bovine Parathyroid Cells, Endocrinology 99, 1582, 1976
牛	牛	Thyroid	Trypsin: 0.004%	EBSS	Tong, W.: The Isolation and Culture of Thyroid Cells, Meth Enzymol 32, 745, 1974
	(包括豬)
雞	雞胚胎	Thyroid	Collagenase: 0.25%	Tyrode's saline, potassium free	Hilfer, S., and Brown, J.: Collagenase. Its Effectiveness as a Dispersing Agent for Embryonic Chick Thyroid and Heart, Exp Cell Res 65, 246, 1971
		Muscle
		Heart
雞	雞, 羅得島紅雞, 胚胎	Thyroid follicular	Collagenase: 0.2%	Tyrode's solution, CMF	Spooner, B.: The Expression of Differentiation by Chick Embryo Throid in Cell Culture. I. Functional and Fine Structural Stability in Mass and Clonal Culture, J Cell Physiol 75, 33, 1970
人類	人類	Endothelial	Collagenase Type 2: 0.1%	DMEM	Pa, V., Logan, A., Watkinson, J., Uz-Zaman, S., Sheppard, M., Ramsden, J. and Eggo, M.:Isolation and Characterization of Human Thyroid Endothelial Cells.,Am J Physiol Endocrinol Metab Vol. 284,, , E168, 2003
人類	人類	Thyrocytes	Collagenase Type 1: 130 u/ml	HBSS	Gianoukakis, A., Cao, H., Jennings, T. and Smith, T.: Prostaglandin Endoperoxide H Synthase Expression in Human Thyroid Epithelial Cells., Am J Physiol Cell Physiol 280, C701, 2001
			Neutral Protease: 0.5 u/ml
人類	人類	Thyrocytes	Neutral Protease: 0.5%	EBSS	Howie, A., Walker, S., Akesson, B., Arthur, J. and Beckett, G.: Thyroidal Extracellular Glutathione Peroxidase: A Potential Regulator of Thyroid-Hormone Synthesis., Biochem J 308 ( Pt 3), 713, 1995
			Trypsin: 0.25%
			Collagenase: 0.1%
人類	人類	Thyroid	Collagenase: 300 u/ml	Ham's F-12/MEM	Miller, R., Hiraoka, T., Nakamura, N., Tenou, H., Kopecky, K., Jones, M. and Gould, M.: In Vitro Culture of Human Thyroid Cells; Methods and Application to Radiation Biology.,J Radiat Res (Tokyo) Vol. 26,, , 269, 1985
小鼠	小鼠, 6 周	Thyroid	Neutral Protease: 0.0012 u/ml	RPMI 1640	Martin, A., Coronel, E., Sano, G., Chen, S., Vassileva, G., Canasto-Chibuque, C., Sedgwick, J., Frenette, P., Lipp, M., Furtado, G. and Lira, S.: A Novel Model for Lymphocytic Infiltration of the Thyroid Gland Generated by Transgenic Expression of the CC Chemokine CCL21., J Immunol 173, 4791, 2004
			Collagenase Type 2: 0.25 u/ml
綿羊	羊	Thyroid	Collagenase: 0.2%	Puck's Saline F	Kerkof, P.: Preparation of Primary Cultures of Ovine Thyroid Gland Cells, J Tiss Cul Meth 7, 23, 1982
豬	豬	Thyroid	Trypsin: 0.004%	EBSS	Tong, W.: The Isolation and Culture of Thyroid Cells, Meth Enzymol 32, 745, 1974
	(包括牛)
大鼠	Lewis大鼠, 雄性, 4 周	Thyroid	Collagenase Type 2: 0.15%	DMEM	Arauchi, A., Shimizu, T., Yamato, M., Obara, T. and Okano, T.: Tissue-Engineered Thyroid Cell Sheet Rescued Hypothyroidism in Rat Models After Receiving Total Thyroidectomy Comparing with Nontransplantation Models.,Tissue Eng Part A Vol. 15,, , 3943, 2009
			Collagenase Type 4: 0.15%

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