nordicmubio FIX＆PERM®細胞固定和通透試劑盒
在流式細胞儀中使用抗體對蛋白質(zhì)生物標志物進行細胞內(nèi)染色，為研究和臨床診斷中的細胞表型和功能表征提供了多種新選擇。
實際上，某些細胞類型的明確表型鑒定可能需要同時標記細胞表面和細胞內(nèi)標記物。另外，典型膜分子的胞質(zhì)定位可以證明是可靠的譜系標志物，例如未分化白血病中的胞質(zhì)CD3和CD22。
在這種情況下，對于許多其他細胞生物學和功能研究，必須進行細胞內(nèi)免疫染色。為此，Nordic-MUbio提供了細胞固定和通透試劑盒FIX＆PERM®，與流式細胞術(shù)中細胞內(nèi)細胞染色的其他方法相比，它具有許多優(yōu)勢。
FIX＆PERM®
- 溫和固定細胞，保留其流式細胞儀散射特征
- 允許同時表征細胞內(nèi)和細胞表面標記
- 快速的技術(shù)–整個過程可以在不到一小時的時間內(nèi)完成，可以立即進行分析或存儲24小時
- 嚴格的質(zhì)量控制程序–使用定義明確的血液樣本并隨后比較獲得的白細胞群的散射特征來確定每批樣品的質(zhì)量，從而確保一批又一批的結(jié)果一致且可靠
- 一系列具有優(yōu)化方案的細胞內(nèi)抗體，可與FIX＆PERM®一起使用
FIX＆PERM®是使用兩種試劑的簡單程序。試劑A輕輕固定細胞，而試劑B透化細胞。特定的制劑可降低背景并允許同時添加通透性培養(yǎng)基和熒光染料標記的抗體，從而可以對細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)（如細胞質(zhì)或核酶，癌蛋白，細胞因子，免疫球蛋白等）進行染色。
程序
對于每個要分析的樣品，在5 ml試管中使用50 µl全血，骨髓或單核細胞懸浮液 - 加入100 µl試劑A（固定介質(zhì)，室溫下保存和使用）
- 在室溫下孵育15分鐘
- 加入5 ml磷酸鹽緩沖鹽水并以300 g離心5分鐘
- 除去上清液，并向細胞沉淀中加入100 µl試劑B（通透性培養(yǎng)基）和20 µl適當?shù)膯慰寺】贵w偶聯(lián)物
- 低速渦旋1-2秒
- 在室溫下孵育15分鐘
- 如上所述，用磷酸鹽緩沖液洗滌細胞
- 除去上清液并將細胞重懸于鞘液中以便立即分析，或?qū)⒓毎貞矣?.5 ml 1.0％甲醛中，并在黑暗中于2-8°C儲存
- 在24小時內(nèi)分析固定細胞
為與FIX＆PERM®一起使用而優(yōu)化的產(chǎn)品
大多數(shù)可用的單克隆抗體偶聯(lián)物均可與FIX一起使用。但是，在某些情況下，可能必須優(yōu)化固定步驟。
Nordic-MUbio提供了多種針對FIX＆PERM®而優(yōu)化的小鼠抗人偶聯(lián)（PE / FITC）單克隆抗體。
| Antigen | Clone | Isotype | Format | Quantity | Cat. No. |
| CD3 | UCHT1 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4011 |
| | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4012 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4013 |
| CD22 | RFB4 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4051 |
| | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4052 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4053 |
| Lactoferrin | 4C5 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4111 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4113 |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4191 |
| (MPO-C2) | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4192 |
| | | | PE-labeled | 100 tests | GM-4193 |
| Lysozyme | LZ-2 | IgG1 | Purified | 0.2 mg | GM-4131 |
| | | | FITC-labeled | 100 tests | GM-4132 |
| CD68 | Ki-M7 | IgG1 | FITC-labeled | 100 tests | GM-4152 |
| IL-1 beta | FIB3 | IgG1 | FITC-labeled | 100 tests | GM-4162 |
| IFN-gamma | GZ4 | IgG1 | FITC-labeled | 100 tests | GM-4172 |
Furthermore, a number of Combi panels are offered for dual immunostaining protocols.
| Antigen | Clone | Isotype | Format | Quantity | Cat. No. |
| Negative control | Vl-AP | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-201 |
| | Vl-AP | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Lysozyme | LZ-2 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-206 |
| Lactoferrin | 4C5 | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-212 |
| Lactoferrin | 4C5 | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-213 |
| CD3 | UCHT1 | IgG1 | PE-labeled | | - |
| Myeloperoxidase | 8E6 | IgG1 | FITC-labeled | 50 tests | GIC-214 |
| CD22 | RFB4 | IgG1 | PE-labeled | |
