Transcreener CD73檢測可測量由ecto-5'-核苷酸酶（也稱為5'-核苷酸酶，NT5E，分化簇73或CD73）產(chǎn)生的腺苷（ADO）。通過測量ADO的產(chǎn)量，研究人員可以有效地確定該酶的活性。該測定法為篩選CD73調(diào)節(jié)劑的整個化合物文庫提供了強大的工具，以幫助尋找疾病的新療法，例如癌癥。
該測定法使用偶聯(lián)酶，該偶聯(lián)酶使用CD73產(chǎn)生的ADO產(chǎn)生產(chǎn)物AMP和ADP。然后可以使用受信任的TranscreenerADP²分析組件來測量ADP。該試劑盒配有測量活性所需的所有檢測試劑。抑制劑篩選測定試劑盒中不包括CD73酶。
外源核苷酸是與細胞膜結(jié)合的酶，具有外部定向的活性位點，可將核苷酸代謝為核苷，對于維持免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。CD39將ATP和ADP水解為AMP。CD73將AMP進一步加工成腺苷，從而對許多疾病產(chǎn)生重大影響。近的研究表明，腺苷在腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制中起著關(guān)鍵作用，而外切核苷酸酶正成為有希望的免疫腫瘤學(xué)靶標。了解更多有關(guān)使用TranscreenerAMP²測定法靶向CD39的信息。
這次演講的重點 是在基礎(chǔ)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中使用Transcreener®ADP 2分析法測量腺苷。涵蓋的主題包括：
Transcreener CD73測定法采用易于HTS使用的混合讀取格式。運行您的酶反應(yīng)，添加Transcreener試劑，然后閱讀板。該測定與96、384和1536孔格式兼容。
當原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為使用標準曲線生成的腺苷時，該測定法證明了線性。
Transcreener Assays設(shè)計用于以高通量格式篩選化合物庫。還可以使用該測定法進行隨訪SAR，從而輕松確定抑制劑的效價。
使用CD73活性測定法篩選了來自Chembridge多樣性庫的子集。該子集的ah率為0.85％，而穩(wěn)健的Z'為0.81。
在存在5 pM CD73的情況下PSB 12379的劑量反應(yīng)曲線。該數(shù)據(jù)說明IC 50為19 nM。
使用優(yōu)化的CD73反應(yīng)條件進行的Z'測量表明存在可靠的分析方法。如此強大的數(shù)據(jù)對于大尺寸的高通量篩選至關(guān)重要，由于大量樣品難以完成。
| 供應(yīng)商 | 儀器 | ||
|---|---|---|---|
 | TriStar²SLB 942 | ||
| 密特拉拉斯LB 943 | |||
 | Cytation™5 | ||
| Cytation™3 | |||
| Cytation™1 | |||
| Synergy™H1 | |||
| Synergy™2 / H4 / 4 | |||
| Synergy™HTX | |||
| Synergy™Neo 2 | |||
 | POLARstar ®歐米茄 | ||
| FLUOSTAR ®歐米茄 | |||
| PHERAstar ® FSX | |||
| PHERAstar ®加/ FS | |||
| CLARIOstar ® /加 | |||
 | 分析師® GT / HT | ||
| 雙子座® XPS / EM | |||
| 的SpectraMax ® M2 / M2e的 | |||
| 的SpectraMax ® M5 /的M5e / FlexStation ® 3 | |||
| 的SpectraMax ®范式 | |||
 | 的EnVision ® /的EnVision ® XCITE | ||
 | 無限® M1000 / M1000Pro / Safire2™ | ||
| 無限® M200 | |||
| 無限® F500 | |||
| 無限® F200 /超進化 | |||
| Spark™10M | |||
| 零件 | 筆記 |
|---|---|
| ADP²抗體 | 核苷酸ADP特異的抗體。 |
| ADP追蹤器 | 替換后，可以以FP分析格式讀取熒光的變化。 |
| 腺苷 | 用于啟動CD73酶促反應(yīng)并生成AMP / ADO標準曲線。 |
| 安培 | AMP用于創(chuàng)建ADO / AMP標準曲線，并用作CD73的底物。 |
| 三磷酸腺苷 | 用作偶聯(lián)酶的底物。 |
| 耦合酶 | 將ADO傳輸?shù)紸DP和AMP，從而允許通過TranscreenerADP²分析組件測量ADP。 |
| 零件 | 筆記 |
|---|---|
| CD73酶 | 我們已經(jīng)成功使用了R＆D Systems Cat。公司的純化重組CD73酶。＃5795-EN。 |
| 酶緩沖液 | 我們已經(jīng)成功使用了pH 7.5的50 mM Tris，5 mM MgCl 2，1％DMSO和0.01％Brij-35緩沖液。 |
| 停止解決方案 | 該測定設(shè)計為以動力學(xué)模式運行。該套件沒有停止解決方案。 |
| 檢測板 | 可以直接通過BellBrook實驗室購買測定板。
FP-需要一個具有非粘合表面的全黑色印版。我們建議使用康寧384孔板Cat。＃4514 |
*對于定制或批量訂單（超過10,000口井），
| 貨號。 | 產(chǎn)品描述 | 價錢 |
|---|---|---|
| 3026-1 K | Transcreener CD73 FP測定法（1,000測定法，384孔） | $ 995 |
| 3026-10K | Transcreener CD73 FP測定法（10,000測定法，384孔） | $ 5,699 |
| 貨號。 | 產(chǎn)品描述 | 價錢 |
|---|---|---|
| 2229 | 康寧384孔黑色檢測板（＃4514），3包（1,000多種檢測） | $ 45 |
| 2230 | 康寧384孔黑色檢測板（＃4514），30包（10,000+檢測） | $ 400 |
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